Глобальные проблемы здоровья человечества
|вирусом и производством вакцины на основе этого вируса. Для разработки | |
|вакцины на основе цельного вируса использовались авирулентный вирус | |
|H5N4, выделенный от мигрирующих уток, вирус H5N1 и авирулентный | |
|рекомбинантный вирус H5N1. Все вакцины были инактивированы формалином. | |
|Интраперитональная иммунизация мышей каждой вакциной вызывала выработку | |
|гемагглютинин-ингибирующих и вирус-нейтрализующих антител, в то время | |
|как интраназальная вакцинация без адьюванта индуцировала как | |
|мукозальный, так и системынй антительный ответ, который защищал мышей от| |
|контрольного заражения летальным вирусом H5N. | |
|Интрамускулярное введение вакцины, приготовленной на основе | |
|непатогенного штамма A/Duck/Singapore-Q/F119-3/97 (H5N3), антигенно | |
|связанного с человеческим вирусом H5N1, в сочетании с квасцами или без | |
|них, приводило к полной защите от летального контрольного заражения | |
|вирусом H5N1. Защита от инфекции наблюдалась у 70% животных, которым | |
|вакцина вводилась сама по себе и у 100% животных, которым вакцина | |
|вводилась в сочетании с квасцами. Протективный эффект вакцинации | |
|коррелировал с уровнем вирус-специфических сывороточных антител. Эти | |
|результаты говорят о том, что в случае пандемии возможно использование | |
|антигенно связанных, но не патогенных вирусов гриппа в качестве | |
|кандидатов в вакцину. | |
|Исследования ДНК вакцин показали, что ДНК вакцина, кодирующая | |
|гемагглютинин из A/Ty/Ir/1/83 (H5N8), который отличается от A/HK/156/97 | |
|(H5N1) в пределах 12% в НА1, предотвращает гибель мышей, но не | |
|заболевание при инфицировании H5N1. Следовательно, ДНК вакцина, | |
|сделанная на основе гетерологичного штамма Н5 не защищает мышей от | |
|инфицирования вирусом птичьего гриппа H5N1, но полезна при защите мышей | |
|от гибели. | |
|Противогриппозные вакцины, индуцирующие значительный перекрестный | |
|гетеросубтипный иммунитет, могут преодолеть ограничения эффективности | |
|вакцин, вызванные антигенной вариабельностью вируса гриппа А. Мыши, | |
|получившие трехкратную интраназальную иммунизацию вакциной H3N2 в | |
|сочетании LT(R192G), были полностью защищены при летальном контрольном | |
|инфицировании высокопатогенным человеческим вирусом H5N1, причем | |
|вирусные титры в носовой полости и легких были по крайней мере в 2500 | |
|раз ниже, чем у контрольных мышей, получавших только LT(R192G). | |
|Напротив, мыши, которые получили трехкратную вакцинацию вакциной H3N2 | |
|подкожно в присутствии или отсутствии LT(R192G) или неполного адьюванта | |
|Фрейнда, не были защищены при летальном контрольном инфицировании и | |
|никакого заметного снижения титров вируса в тканях не наблюдалось на 5 | |
|день после контрольного инфицирования вирусом H5N1. Вакцинация без | |
|LT(R192G) приводила лишь к частичной защите против гетеросубтипного | |
|контрольного заражения. Результаты исследования гетеросубтипного | |
|иммунитета подтвердили полезность мукозальной вакцинации, которая | |
|стимулирует перекрестную защиту против множества вирусных субтипов, | |
|включая вирусы, представляющие потенциальную пандемическую опасность. | |
| | |
|Разработка средств обнаружения и диагностики | |
|Во время вспышки 1997 года анализ ингибирования гемагглютинации, | |
|стандартный для серологического определения инфекции гриппа у человека, | |
|показал низкую чувствительность при определении антител к вирусу | |
|птичьего гриппа. В связи с этим, для определения антител к вирусу | |
|птичьего гриппа у человека был предложен более чувствительный метод | |
|микронейтрализации и Н5 специфический непрямой ELISA (иммуноферментный | |
|анализ). Чувствительность и специфичность этих методов была сравнима и, | |
|кроме того, значительно увеличивалась при сочетании с Вестерн-блотом. | |
|Максимальная чувствительность (80%) и специфичность (96%) при | |
|определении анти Н5 антител у взрослых в возрасте от 18 до 59 лет | |
|достигалась при применении микронейтрализации в сочетании с Вестерн | |
|блотом, а максимальная чувствительность (100%) и специфичность (100%) | |
|при определении анти Н5 антител в сыворотке детей моложе 15 лет | |
|достигалась при применении ELISA в сочетании с Вестерн блотом. Этот | |
|алгоритм может использоваться при проведении сероэпидемиологических | |
|исследований вспышек птичьего гриппа H5N1. | |
|Было также показано, что высокопатогенные нейротропные варианты вируса | |
|птичьего гриппа H5N1 могут быть быстро выделены на мышах. | |
|Кроме того, еще в 1995 году для быстрого определения последовательности | |
|сайта расщепления гемагглютинина, маркера потенциала вирулентности | |
|вирусов птичьего гриппа, была использована RT-PCR (полимеразная цепная | |
|реакция). Эта методика в сочетании с сиквенсом сайта расщепления | |
|гемагглютинина может служить в качестве быстрого и чувствительного | |
|метода оценки потенциальной вирулентности вирусов птичьего гриппа. | |
|Раннее обнаружение связанных с вирулентностью последовательностей на | |
|сайте расщепления гемагглютинина в полевых изолятах вируса поможет лучше| |
|контролировать грипп среди огромной популяции домашней птицы. | |
|В дальнейшем был разработан простой молекулярный метод быстрого | |
|генотипирования для мониторинга внутренних генов циркулирующего вируса | |
|гриппа А. Стратегия субтипирования вируса была протестирована вслепую на| |
|10 контрольных вирусах каждого субтипа H1N1, H3N2 и H5N1 (всего на 30) и| |
|обнаружила высокую эффективность. Стандартизованный метод | |
|генотипирования использовался для идентификации источника внутренних | |
|генов 51 вируса гриппа А, выделенного от людей в Гонконге в ходе вспышек| |
|1997-1998 годов и сразу после них. Эта же методика использовалась для | |
|характеристики внутренних генов двух изолятов вируса птичьего гриппа | |
|H9N2, полученных в Гонконге в 1999г. | |
|Позднее был разработан real-time reverse transcriptase PCR (RRT-PCR) | |
|анализ для быстрого определения вируса гриппа А и субтипов Н5 и Н7 | |
|вируса гриппа А. В этом анализе используется одностадийный способ | |
|определения и флуоресцентные зонды. Предел определения - около 1000 | |
|копий мишени-РНК. С помощью этого метода можно определить 0,1 50%-ную | |
|инфекционную дозу для куриных эмбрионов. Для анализа субтипов вируса | |
|гриппа А предел определения - 103-104 копии мишени-РНК. Чувствительность| |
|и специфичность данного метода напрямую сравнивалась со стандартными | |
|методиками для определения вируса гриппа: выделение гриппа на куриных | |
|эмбрионах и субтипирование гемагглютинина в реакции ингибирования | |
|гемагглютинации. Сравнение проводилось на 1550 трахеальных и клоачных | |
|мазках от различных видов птиц и мазков, взятых из окружающей среды на | |
|рынках живой птицы в Нью-Йорке и Нью-Джерси. Результаты RRT-PCR | |
|коррелировали с результатами выделения гриппа на куриных эмбрионах в 89%| |
|образцов. Остальные образцы были положительными при определении только | |
|одним из методов. В целом чувствительность и специфичность Н7- и | |
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16
