RSS    

   Атф индуцированное изменение внутриклеточной концентрации кальция в нейронах неокортекса крыс

последовательному уменьшению амплитуды [Ca2+]i транзиента и после

двух - трех последовательных аппликаций сигнал исчезал вообще

(рисунок 10). Такое уменьшение вероятно обусловлено истощением

внутриклеточных депо.

[pic]

1. Ингибирование захвата Ca2+ эндоплазматическим ретикулом тапсигаргином

(спецефическим блокатором Ca2+ насоса эндоплазматического ретикулума)

уменьшало [Ca2+]i транзиенты, вызванные приложением АТФ, на 63% ( 5%

для концентрации АТФ 100 мкМ АТФ (рис. 11). Как видно из рисунка 11

приложение тапсигаргина не влияло на базальный уровень Ca2+ в клетке.

1. Приложение кадмия в концентрации 50 мкМ, верапамила в концентрации

100 мкМ и 50 мкМ никеля обратимо уменьшало амплитуду [Ca2+]i

транзиента вызванного приложением 100 мкМ АТФ на 35%, 20%, и 15%

сответственно. Данные представлены на рисунке 12.

[pic]

1. Приложение различных агонистов пуринорецепторов вызывало различные по

амплитуде ответы. Порядок относительной активности лигандов для

данного объекта был следующим ATP(S ( ATФ ( AДФ (( (,(-methylene ATP

( AMФ ( УТФ(( аденозин (ADO), данные преставлены на рисунке 13.

[pic]

1. Сурамин, известный антагонист Р2 типа пуринорецепторов, уменьшал

[Ca2+]i транзиенты, вызванные приложением 100 мкМ АТФ на 76% ( 7% и

также не изменял концентрацию [Ca2+]i в покое. Данные представлены

на рисунке 14.

[pic]

ОБСУЖДЕНИЕ

При исследовании средних слоев неокортекса крыс мы обнаружили их

способность отвечать на приложение АТФ. Таким образом мы можем сделать

вывод о наличии в данном объекте пуринорецепторов. Ответ на АТФ является

доза - зависимым с амплитудой половинного ответа в 220 нМ. Последовательные

приложения АТФ, после второго приложения, не вызывали уменьшения амплитуды

[Ca2+]in транзиентов. Из этого можно сделать вывод об отсутствии

десенситизации данного типа рецепторов.

Исследуя источники повышения цитозольного кальция мы обнаружили, что

АТФ активирует как ионотропные так и метаботропные рецепторы. Блокаторы

потенциал - управляемых кальциевых каналов такие как кадмий, никель и

верапамил уменьшали АТФ - индуцированные кальциевые транзиенты на 35% -

15%, что говорит об опосредованном АТФ активировании потенциал -

управляемых каналов.

Для исследования активацию метаботропных рецепторов. Для этого мы

прилагали АТФ в бескальциевом растворе, - амплитуда ответа при этом

уменьшалась на 45% ( 7%. Этот результат говорит о том, что внутриклеточные

депо принимают участие в генерации [Ca2+]in ответов, причем их вклад близок

к половине. При повторных аппликациях АТФ в бескальциевом растворе Ca2+

ответ исчезал полностью после второй аппликации, т.е. внутриклеточные депо

полностью истощаются. Исследуя путь высвобождения внутриклеточного кальция

мы апплицировали тапсигаргин - спецефический блокатор АТФ - азы

эндоплазматического ретикулума. [Ca2+]in транзиенты уменьшались на 63% ( 5%

в присутствии тапсигаргина. Аппликация коффеина, агониста рианодиновых

рецепторов, в клетках моторной коры 14 дневных крыс не вызывали повышения

уровня [Ca2+]in . Следовательно выброс [Ca2+]in из внутриклеточного депо

происходит по IP3 - чувствительному механизму.

В дальнейшем мы исследовали более подробно типы присутствующих

пуринорецепторов. Построив ряд активности агонистов для Р1 и Р2

пуринорецепторов по амплитудам ответов, мы сделали заключение базирующееся

на отсутствии ответа на аденозин, что в нашем объекте присутствуют только

Р2 пуринорецепторы. Проводя дальнейшую субклассификацию Р2 типа рецепторов

мы использовали сурамин - блокатор некоторых типов Р2х и Р2у рецепторов.

Приложение сурамина уменьшало амплитуду [Ca2+]i транзинета вызванного

приложением 100 мкМ АТФ на 76% ( 5%, что говорит о наличии этих типов

рецепторов в исследуемом объекте.

ВЫВОДЫ

1. Приложение АТФ в различных концентрациях вызывает Ca2+ транзиенты в

клетках моторной коры крыс.

2. Ответ на АТФ является доза - зависимым с амплитудой половинного ответа в

220 нМ.

3. АТФ активирует как ионотропный так и метаботропные пути повышения

внутриклеточного кальция.

4. В генерации АТФ индуцированного повышения [Ca2+]in принимают участие

некоторые типы потенциал - управляемых кальциевых каналов.

5. Высвобождение внутриклеточного кальция происходит из IP3 чувствительных

депо.

6. В данном объекте присутсвуют только Р2 подтипы пуринорецепторов.

7. Сурамин - антагонист Р2Х2 и Р2Х5 и Р2У рецепторов уменьшает амплитуду

[Ca2+]in транзиенты, что говорит присутствии некоторых из

вышеперечисленных рецепторов.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. A.Shmigol, A.Verkhratsky & G. Isenberg (1995): Calcium-induced

calcium release in rat sensory neurones. Journal of Physiology

(London), 489.3 627-636.

2. A.Shmigol, G. Isenberg, P.Kostyuk & A. Verkhratsky (1994): Calcium-

induced Ca2+ release from internal stores in rat dorsal root

ganglion neurones. In: European Journal of Neuroscience, Suppl. 7,

Proceedings of the 16th Annual ENA Meeting, p. 146.

3. A.Shmigol, N.Svichar, P.Kostyuk & A.Verkharatsky. (1995):

“Incremental” caffeine-induced calcium release in mouse sensory

neurones. European Joutnal of Neuroscience, Supple № 8. p111.

Proceedings of the 16th Annual ENA Meeting.

4. A.Shmigol, Yu.Usachev, N.Pronchuk, S.Kirischuk, P.Kostyuk &

A.Verkhratsky (1994): Properties of the caffeine sensitive

intracellular calcium stores in mammalian neurons. Neurophysiology

/Neirophiziologia, v. 26 No. 2, p. 16 - 25.

5. A.Verkhratsky, A. Shmigol, S. Kirischuk, N. Pronchuk & P. Kostyuk

(1994): Age-dependent changes in calcium currents and calcium

homeostasis in mammalian neurons. Annals of the New York Academy

of Sciences, v. 747, p365 - 381.

6. Abbracchio, M. P., Burnstock, G. (1994) Purinoceptors: are there

families of P2x and P 2y purinoceptors? Pharmac. Ther. 64: 445-475

7. Anatoly Smigol, Platon Kostyuk, Alexey Verhratsky (1994) Role of

caffeine-sensitive Ca2+ stores in Ca2+ signal termination in adult

DRG neurones // NeuroReport v.5, 2073-2076.

8. Anatoly Smigol, Sergey Kirischuk, Platon Kostyuk, Alexey

Verhratsky (1994) Different properties of caffeine-sensitive Ca2+

stores in peripherial and central mammalian neurones // Pflugers

Arch v.426, 174-176.

9. Baker P. F., Blaustein M.P., Hodgkin A.L. and Steinhardt R. A. (1969)

The influence of calcium on sodium efflux in squid axons. J. Physiol.,

Lond. 200, 431-458.

10. Bean B.P. (1992) Pharmacology and electrophysiology of ATP-activated

ion channels. Trends Pharmacol. Sci. 13, 87 - 90.

11. Belan P., Kostyuk P., Snitsarev V. and Tepikin A. (1993) Calcium clamp

in isolated neurones of the snail Helix pomatia. J. Physiol., Lond.

462, 47 - 58.

12. Bronner, F. (1990). Intracellular Ca2+ regulation.. New York: Wiley-

Liss.

13. Burk S. E., Lytton J. , MacLennan D. H. and Shull G. E. (1989). cDNA

cloning, functional expressing, and mRNA tissue distribution of a third

organellar Ca2+ pump. J. Biol. Chem. 164, 18561-18568.

1. Burnstock, G. (1972) Purinergic nerves. Pharmacol. Rev. 24: 509-581

1. Burnstock, G. (1978) A basis for distinguishing two types of

purinergic receptor. in: book

1. Burnstock, G. (1990) Co-transmission. Arch. Int. Pharmacodyn. 304: 7-33

14. Burnstock, G., Kennedy, C.(1985) Is there a basis for distinguishing

two types of P2 purinoceptor? Gen.Pharmacol. 16: 433-440

15. Carafoli E. (1992) Calcium pump of the plasma membrane. Physiol. Rev.

71, 129 - 153.

16. Chen, C.-C., Akopian, A.N. et al, (1995) A P2x purinoceptors expressed

by a sybset of sensory neurones. Nature 377: 428 - 431

17. Кришталь О.А., Марченко С.М. (1983). Рецепторы АТФ в сенсорных нейронах

млекопитающих. Докл. Акад. Наук УССР.

18. Gianini G., Clementi E., Ceci R., Marziali G., and Sorremtino V. (1992)

Expression of a ryanodine receptor Ca2+ that is regulated by TGF-b,

Science, 257, 91 - 94.

19. Ginetta Collo et al, (1996) Cloning of P2X5 andP2X6 receptors and the

distribution and properties of an extended family of ATP-gated ion

channels. The J. of Neurosci. 16(8): 2495-2507

20. Gordon, J. L. (1986) Extracellular ATP: effects, sources and fate.

Biochem.J. 233: 309-319

21. Grynkiewicz, G., Poenie, M., and Tsien, R.Y. A new generation of Ca2+

indicators with greatly improved fluorescent properties. J. Biol.

Chem., 260, 3440-3450, 1985.

22. Heizmann C.W. and Hunziker W. (1991) Intracellular calcium-binding

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6


Новости


Быстрый поиск

Группа вКонтакте: новости

Пока нет

Новости в Twitter и Facebook

                   

Новости

© 2010.