RSS    

   Содержание аскорбиновой, дегидроаскорбиновой и дикетогулоновой кислот в эритроцитах здоровых детей и страдающих инсулинзависимым сахарным диабетом

действию восстановителей, при этом в АК восстанавливается только ДАК. В

качестве восстановителя использовали димеркаптопропансульфонат натрия

(унитиол)

Реактивы:

1. 2.10 М унитиол (0.84 мл 5% раствора ампулированного препарат в 100 мл

0.2 М фосфатного буфера рН 7.0. хранить не более суток).

2. 5% трихлоруксусная кислота (ТХУ). Хранить в холодильнике не более

двух недель.

3. 85% раствор серной кислоты (100 мл воды + 900 мл концентрированной

серной кислоты).

4. 2% раствор 2,4-динитрофенилгидразина в 9Н серной кислоте, содержащей

0.25% тиомочевины (хранить в холодильнике не более 1 месяца).

5. 0.001 Н раствор 2,6- дихлорфенолиндофенолята натрия (краска

Тильманса). Хранить в темноте не более 1 недели.

6. 0.9% раствор хлорида натрия (физиологический раствор).

Ход определения.

В три пробирки помещали по 0.5 мл упакованных и отмытых от плазмы

эритроцитов с известным гематокритом. В первую прибавляли 0.25 мл

физиологического раствора и 0.25 мл унитиола. После пятнадцатиминутной

инкубации при периодическом помешивании суспензии отбирали 0.5 мл

экстракта, к которому прибавляли 1.5 мл ТХУ.

В две другие пробирки также прибавляли по 1.5 мл ТХУ.

В две пробирки вносили по 0.75 мл супернатанта, полученного при

центрифугировании смеси упакованных эритроцитов с ТХУ. В одну из пробирок

добавляли по каплям 0.001 Н раствор 2,6- дихлорфенолиндофенолята натрия до

появления слаборозового окрашивания, устойчивого в течение 30 секунд. В

третью пробирку помещали 0.75 мл супернатанта, полученного после

центрифугирования смеси упакованных эритроцитов с физиологическим

раствором, унитиолом и ТХУ. Во все пробирки добавляли по 0.25 мл 2,4-

динитрофенилгидразина и доводили объём до 1.25 мл дистиллированной водой,

инкубировали при 100 0 С в течение 10 минут и охлаждали в ледяной бане. В

каждую пробирку добавляли небольшими порциями 1.25 мл 85% раствора серной

кислоты, охлаждая в ледяной бане после каждой порции. Окрашенные растворы

фотометрировали через час при длине волны 540 нм.

Концентрацию кислот определяли по формуле:

С = (3*А)/0.085; где

С – концентрация кислот, мг%

3 – концентрация стандартного раствора, мг%

А – оптическая плотность пробы

0.085 – оптическая плотность стандартного раствора

2.3. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты исследований обрабатывались статистически (Лакин И.А., 1976).

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Целью исследования являлось определение содержания аскорбата и его

окисленных форм – ДАК и ДКГК в общей эритроцитарной массе взрослых,

страдающих ИЗСД, со стажем болезни более 10 лет; сравнение и сопоставление

полученных результатов с данными, полученными ранее, в ходе работы со

здоровыми детьми и страдающими ИЗСД. В эксперименте участвовал 21 взрослый

в возрасте от 25 до 40 лет, 37 больных детей и группа контроля, включающая

10 здоровых детей. Результаты исследований отображены на диаграммах.

Рис.1. Содержание общей АК, АК, ДАК и ДКГК в эритроцитах здоровых детей

и детей, страдающих ИЗСД (мг%)

Рис. 2. Содержание общей АК, АК, ДАК и ДКГК в эритроцитах взрослых,

страдающих ИЗСД (мг%)

Как следует из полученных результатов, в эритроцитах детей и взрослых,

страдающих ИЗСД, наблюдается увеличение содержания окисленной форма АК-ДАК,

что может свидетельствовать о нарушении процесса восстановления АК в ДАК,

большем участии АК в метаболических процессах, нарушении транспорта АК в

клетке.

Процентное содержание общей АК, АК, ДАК и ДКГК также демонстрирует

превалирование окисленных форм АК над восстановленной.

Рис. 3. Содержание общей АК, АК, ДАК и ДКГК в эритроцитах здоровых детей

и страдающих ИЗСД (%).

Рис. 4. Содержание общей АК, АК, ДАК и ДКГК в эритроцитах взрослых,

страдающих ИЗСД (%).

Все полученные данные согласуются с данными литературы об изменении

общего количества АК в организме при патологии (нормальное содержание

составляет 5 – 15 мг%) и соотношения «окисленная форма АК/восстановленная

форма АК» в сторону увеличения первой.

ВЫВОДЫ

1. Содержание общей АК в эритроцитах детей и взрослых, страдающих ИЗСД,

составляет 19.52 мг% и 6,47 мг%, в эритроцитах здоровых детей –

12.48 мг%.

2. Содержание восстановленной АК в эритроцитах больных детей и взрослых

составляет 4.1 и 2,01 мг% (20.5 и 31% от общей АК), в эритроцитах

здоровых детей – 4.28 мг% (33%).

3. Содержание окисленных форм АК – ДАК и ДКГК в эритроцитах больных

детей и взрослых составляет 15.5 и 4.46 мг% (79.5 и 69% от общей

АК), в эритроцитах здоровых детей – 8.36 мг% (67%).

4. В общей эритроцитарной массе больных детей соотношение окисленная

форма АК/ восстановленная форма АК составляет 4/1, что

свидетельствует о превалировании окисленной формы АК над

восстановленной.

5. В общей эритроцитарной массе здоровых детей это соотношение равно

2/1, т.е., налицо тенденция к росту содержания восстановленной АК.

Заключение

Уже давно доказали тот факт, что аскорбиновая кислота является

постоянной составной частью тканей и органов человека. Важность выполняемых

ею физиологических функций не подлежит сомнению. Некоторые из них давно

известны и хорошо изучены. Например, то, что витамин С оказывает

благоприятное воздействие на работу иммунной системы, нормализует

эритропоэз и продукцию коллагена, является компонентом антиоксидантной

системы клетки. Однако многочисленные исследования недавнего времени

показали, что возможности этого вещества гораздо шире, чем представлялось

до сих пор. К примеру, было обнаружено ценное свойство аскорбата

нормализовать уровень сахара в крови, оказывая положительное воздействие на

углеводный обмен. При выполнении этой и других биохимических функций

аскорбиновая кислота обратимо окисляется в ДАК, при последующем воздействии

окислителя необратимо переходит в ДКГК. По данным литературы, соотношение

«окисленная форма АК/восстановленная форма АК» может изменяться при

различных патологиях, как и ее общее содержание в организме. Одной из

распространенных патологий является инсулинзависимый сахарный диабет.

Поскольку ИЗСД является эндокринной патологией, протекающей с нарушением

углеводного обмена, в регуляции которого аскорбат играет немаловажную роль,

было бы логичным предположить, что его содержание в организме больного

окажется иным, чем у здорового человека. Экспериментальные данные

подтвердили это предположение. В организме больного ребенка содержание

общей АК повышено на 37 % по сравнению с общей АК и составляет 19,52 мг%,

тогда как нормальным считается наличие от 5 до 15 мг% аскорбата. Среднее

значение АК у здорового ребенка – 12,48 мг%. В то время как содержание ДКГК

в процентном соотношении практически не изменено и составляет у больных и

здоровых детей 46 и 49,4 % соответственно (6,16 мг% и 8,96 мг%),

концентрация ДАК у больных детей повышена против здоровых почти вдвое и

составляет 33,5 % вместо 17,6 % (6,54 мг% и 2,2 мг%). Основные различия

выявляются в процентном содержании восстановленной формы АК. Ее содержание

у здоровых детей составляет 33 % общей АК (4,28 мг%), тогда как у больных

детей оно ниже на 13 % и составляет 4,1 мг%. Таким образом, соотношение

«окисленная форма АК/восстановленная форма АК» у больных детей составляет

4:1, в отличие от здоровых детей, у которых оно равняется 2:1.

На основании этих данных можно предположить следующие причины подобных

изменений содержания общей АК и ее метаболических форм в организме больных

ИЗСД детей:

1) При ИЗСД нарушены все виды обмена веществ в организме – углеводный,

белковый и жировой. В последнем случае возрастает количество

свободных радикалов, вследствие чего АОС испытывает большую нагрузку.

Возрастает содержание одного из ее компонентов – аскорбата, он более

активно включается в метаболические процессы, возможно, тем самым в

какой-то мере компенсируется снижение концентрации другого ее

компонента – С-SH;

2) Почти двукратное возрастание уровня ДАК в организме больного ребенка

при практически неизменном количестве ДКГК может свидетельствовать о

нарушении процесса восстановления ДАК в АК; возможно снижена

активность фермента ДАК – редуктазы. При ИЗСД ее активность снижена

на 50 %, что приводит к сокращению содержанияС-SH, необходимого для

процесса восстановления ДАК в АК. Одновременно снижается активность

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5


Новости


Быстрый поиск

Группа вКонтакте: новости

Пока нет

Новости в Twitter и Facebook

                   

Новости

© 2010.