Содержание аскорбиновой, дегидроаскорбиновой и дикетогулоновой кислот в эритроцитах здоровых детей и страдающих инсулинзависимым сахарным диабетом
проявляется только при наличии свободных гидроксильных групп. Различные
функциональные производные по ним лишают молекулу витаминной активности
почти полностью, как и гидрирование ненасыщенной связи лактонного кольца.
Поэтому L-ДАК имеет витаминную активность, равноценную L-АК, тогда как 2,3-
ДКГК полностью ее лишена. Вследствие легкой окисляемости L-АК – донор Н+,
она количественно легко восстанавливает многочисленные соединения, как-то:
йод, перманганат калия и другие. L-АК – переносчик Н+ в некоторых
ферментативных реакциях живой клетки, она легко окисляется пероксидазой,
цитохромоксидазой, каталазой. L-АК восстанавливает окисленные формы
ферментов, окисляясь в ДАК, обратимо легко регенерирующуюся в АК под
действием глутатиона за счет его сульфгидрильной группы:
[pic]
[pic]
[pic]
[pic]
Окисление АК катализируется медью, в меньшей степени – катионами серебра
и железа. Имеется предположение, что специфическим катализатором окисления
АК в животных организмах является белок, синтезирующийся в печени,
осуществляющий транспорт меди, обладающий оксигеназной активностью, -
церулоплазмин. В меньшей степени окисление аскорбата катализируют другие
катионы, в частности, серебра и железа. Комплексоны, флавоноиды тормозят
окислительный распад АК. Некоторые белки ингибируют окисление АК,
связываясь с ней или путём образования комплекса с медью – сывороточные
глобулины (Борец, 1980). Окисление тормозится –SH содержащими соединениями:
сернистая кислота блокирует фермент аскорбиназу; С-SH связывает ионы Cu+,
удаляя т. с. катализатор окисления АК из реакции (Киверин, 1971).
1.2.2. Биосинтез АК в живом организме
L-АК синтезируется в растениях и организме некоторых животных из D-
глюкозы через лактон D-глюкуроновой кислоты и L-гулоно-?-лактон или их
производное. В процессе биосинтеза происходит превращение соединений D-ряда
в соединения L-ряда (Березовский, 1993):
Биосинтез АК в организме животных происходит в клетках печени, почек,
надпочечников, гипофиза, стенки тонкого кишечника (Киварин, 1973).
1.2.3. Физиологические свойства аскорбата
Витамин С является постоянной составной частью тканей и органов
человека. Его поступление в организм должно быть ежедневным, т. к.
аскорбат, играя важную роль в обменных процессах организма, все время
расходуется. Он восстанавливает окисленные формы ферментов, активирует
некоторые протеазы, тормозит действие амилазы и протеазы поджелудочной
железы, активирует эстеразу печени. L-АК участвует в обмене некоторых
ароматических аминокислот, регулирует уровень холестерина в крови,
усиливает антитоксические функции гепатоцитов (вкупе с глюкозой),
норамализирует белковообразование. Витамин С необходим для нормального
функционирования клеток, продуцирующих коллаген, активирует и регулирует
зритропоэз (способствуя усвоению железа), нормализует нарушенное
протромбинообразование, нормализует процессы свертывания (Андреев; 1996).
Аскорбат играет положительную роль в развитии иммунных реакций организма,
обладает некоторым детоксицирующим свойством, является существенным
фактором профилактики и лечения инфекционных заболеваний.
Витамин С оказывает положительное воздействие на углеводный обмен.
Волынский З. М. с сотрудниками показали, что повышает синтез гликогена в
печени, и что нарастание содержания гликогена в печени, как правило, прямо
пропорционально повышению в этом органе витамина С. К такому выводу
позволяют прийти многочисленные клинические наблюдения последнего времени,
подтверждающие ценное свойство АК обладать нормализующим действием на
уровень сахара в крови. Подобный эффект связан с синергическим действием
аскорбата и гормонов – инсулина и адреналина. Витамин С может усиливать
действие инсулина или действовать аналогично ему, способствуя образование
гликогена в печени. Синергизм возникает косвенным путем через воздействие
инсулина и витамина С на общегормональный фон организма.
Таким образом, АК оказывает разностороннее влияние на процессы обмена
веществ у здоровых людей, а при различных патологических состояниях
благоприятствует нормальному течению обмена веществ и функционированию
различных органов и систем организма (Бременер; 1997).
5 Сахарный диабет как один из распространенных патологических процессов
Диабет сахарный (diabetes mellitus; сахарная болезнь, сахарное
мочеизнурение) – эндокринное заболевание, обусловленное дефицитом гормона
инсулина в организме или его низкой биологической активностью;
характеризуется хроническим течением, нарушением всех видов обмена веществ,
ангиопатией.
Сахарный диабет представляет собой самую распространённую эндокринную
патологию. В его развитии существенную роль играют наследственная
предрасположенность и неблагоприятное воздействие окружающей среды, однако,
характер наследственной предрасположенности и так называемых факторов риска
различны при разных типах сахарного диабета. Факторами риска развития
сахарного диабета являются появление антител к (-клеткам островков
поджелудочной железы, частые вирусные инфекции, гиподинамия, ожирение,
нерациональное или недостаточное питание, стрессы, генетически отягощенный
по сахарному диабету анамнез и другие.
Согласно классификации ВОЗ, различают два основных типа сахарного
диабета. Это инсулинзависимый (I тип) и инсулиннезависимый (II тип)
сахарный диабет. Инсулинзависимый сахарный диабет, как правило, развивается
у лиц молодого возраста и детей, имеющих генетическую предрасположенность к
сахарному диабету именно данного типа. Инсулиннезависимым сахарным диабетом
чаще болеют лица, старше 50 лет (особенно женщины). Наследственная
предрасположенность играет большую роль, чем при сахарном диабете I – типа.
Механизм развития сахарного диабета сложен и многогранен. Он зависит
как от функции самой поджелудочной железы, так и от внепанкреатических
факторов. Прежде всего, нарушен обмен углеводов. Из-за недостатка инсулина
или других причин затрудняется переход глюкозы в мышечную и жировую ткань,
снижается синтез гликогена в печени, усиливается образование глюкозы из
белков и жиров (глюконеогенез). В развитии этих процессов увеличивается
содержание глюкозы в крови. Если в норме оно довольно устойчиво и натощак у
здоровых людей колеблется в пределах 3,33 – 35,55 ммоль/л (70 – 100 мг%),
то при сахарном диабете в зависимости от формы и тяжести течения обычно
превышает 6,00 ммоль/л, достигая 20 –30 ммоль/л и больше.
Диабет у детей и подростков характеризуется тяжелым течением и, как
правило, острым началом заболевания. От времени появления первых признаков
заболевания (жажда, похудание, выделение большого количества мочи, общая
слабость, сухость кожи) до развития тяжёлого состояния и значительных
нарушений обмена веществ, проходит обычно 2 недели. Дети, больные сахарным
диабетом, требуют обязательного лечения и постоянного лечебного контроля.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Нами обследован 41 ребёнок, страдающий инсулинзависимым сахарным
диабетом, и 10 человек контрольной группы. Объектом исследования служили
эритроциты больных и здоровых детей. Для получения эритроцитов кровь брали
из локтевой вены капельным способом, в качестве антикоагулянта использовали
гепарин.
Исследования проводили в общей эритроцитарной массе детей, страдающих
инсулинзависимым сахарным диабетом, и детей контрольной группы.
2.1. Подготовка эритроцитов
Свежую гепаринизированную кровь разливали в центрифужные пробирки по 5
мл. После пятнадцатиминутного центрифугирования при 3000 об/мин при 40 С
отбирались и отбрасывались лейкоцитарный слой и плазма. Эритроциты
суспендировали в десятикратном объёме 0.9% раствора NaCl и
центрифугировали в течение пятнадцати минут при 3000 об/мин. Супернатант
отсасывали, процедуру повторяли 3 раза. Это делалось для более плотной
упаковки эритроцитов.
2.2. Метод раздельного определения аскорбиновой, дегидроаскорбиновой и
дикетогулоновой кислот в эритроцитах
Для количественных определений АК, ДАК и ДКГК использовали метод J.H.
Roe, C.A. Kuether (1943) в модификации В.В. Соколовского, Л.В. Лебедевой,
Т.Б. Лиэлуп (1967). Метод основан на взаимодействии 2,4-
динитрофенилгидразина с ДАК с образованием в серной кислоте
соответствующего озазона. ДАК и ДКГК дают красное окрашивание, используемое
для фотометрического определения. Для вычисления суммы всех кислот их
окисляют 2,6- дихлорфенолиндофенолятом натрия. Содержание АК определяют по
разности. Для дифференцированного определения ДАК и ДКГК смесь подвергают
