Клеточная инженерия
или сахароза. Азот добавляется в форме нитратов, используемых клетками с
помощью нитратредуктазы. Применяют также фосфор, калий, кальций, магний,
сульфаты. Необходимым компонентом являются витамины, в особенности группы В
(В1, В2, В6), миоинозит, биотин, а также аминокислоты и органические соли.
К безусловно необходимым микроэлементам относятся бор, марганец, иод, медь,
кобальт, молибден. Так, недостаток марганца препятствует синтезу белков,
уменьшает количество РНК и приводит к увеличению содержания свободных
аминокислот. Железо имеет значение для деления ядра и для деятельности
дыхательных ферментов. Наконец, необходимо наличие в питательной среде ряда
фитогормонов. Манипулируя концентрациями различных веществ в питательных
средах, кислотностью последних, температурой, освещенностью и влажностью в
камерах для культивирования, можно получить растения и вещества с
требуемыми свойствами. В зависимости от используемых растительных клеток и
тканей, способов культивирования различают следующие основные типы
структур: каллюсные, суспензионные, протопластов, меристематические,
пыльников.
Каллюсные структуры
Для каллюсных структур исходным материалом является каллюс - это
ткань, образующаяся у растений на местах ранений и способствующая их
заживлению. Она состоит из более или менее однородных паренхимных клеток,
начало которым дает раневая меристема. Элементы каллюса мало
дифференцированы, однако вблизи его поверхности наблюдается рост,
обусловленный активностью меристематических клеток. Впоследствии в каллюсе
возможна дифференцировка его элементов и образование флоэмы, ксилемы и
других тканей. Наружные клетки каллюса опробковевают.
Для культивирования на выбранном органе делают надрез, на всей
поверхности которого развивается ткань, состоящая из неорганизованно
растущих клеток. Эта образовавшаяся ткань и культивируется в заданных
условиях. В зависимости от вида растения и поставленной цели предварительно
необходимо установить состав питательных сред и концентрации фитогормонов,
требуемых для оптимального роста. Каллюсы могут выглядеть очень различно.
Они бывают рыхлыми или плотными. Окраска каллюса позволяет судить об
образовании вторичных веществ. Если каллюс содержать в полной темноте, он
беловато-желтый. На свету он образует хлорофилл и становится зеленым.
Красный свет указывает на наличие антоциана и бетациана. Чтобы ослабить или
устранить эти эффекты, в питательную среду добавляют поливинилпирролидон,
глутатион или аскорбиновую кислоту. Коричневые клетки образуются перед
отмиранием, поэтому такую ткань необходимо поместить в свежую среду. При
длительном культивировании каллюсы могут терять свой морфогенетический
потенциал. После нескольких смен питательных сред и при добавлении ростовых
гормонов каллюс дифференцирует и регенерирует, образует осевые побеги,
корни и, наконец, все растение целиком, способное к размножению и
выращиванию в грунте. Однако большей частью каллюсы используются в качестве
исходного материала для клеточного или суспензионного культивирования.
Суспензионная культура
Для суспензионных культур исходным материалом могут быть кака
изолированные целые клетки выбранного органа растения, так и измельченный
каллюс. Образовавшиеся клетки помещают в жидкую питательную среду и
культивируют при постояном перемешивании. Рост суспензионной культуры
происходит во многих случаях существенно быстрее, чем каллюсной культуры,
поскольку скопления клеток поглощают питательные вещества значительно
большей общей поверхностью, а у каллюса это происходит лишь в той его
части, которая лежит на субстрате. При этом происходит деление клеток,
новые клетки не отделяются, и их скопление увеличивается. С помощью особых
приемов суспензионную культуру можно перенести на твердую питательную
среду. Здесь из клеток или комплексов клеток может образоваться способный к
жизни каллюс. В суспензии могут возникнуть также и зародыши, которы после
их переноса на агар образуют новое растение.
Культура протопластов.
Культуры протопластов получают главным образом из приготовленной из
мезофила суспензии, обрабатывая ее ферментами, разрушающими клеточные
стенки. В результате этого может произойти присоединение чужих органелл, а
также чужой ДНК, которая встраивается в генетический материал ядра, что
может выразиться в экспрессивности. Поскольку поверхности протопластов
имеют отрицательный заряд, необходимо нейтрализовать их отталкивание друг
от друга, после чего они соединяются. После слияния происходит регенерация
клеточной стенки. Она образуется менее чем за сутки, после чего клетки
начинают делиться и регенерируют новые растения. Во многих случаях
удавались слияния протопластов разных родительских растений и последующая
регенерация через культуру каллюса нового растения с заданными свойствами.
Оказалось возможным скрещивать представителей разных видов и родов, что
прежде не удавалось. Слиянием протопластов вырастили, например, гибрид
картофеля и томата, "томофель". Этот способ имеет коммерческое значение при
выведении новых сортов соевых бобов, цитрусовых, сахарного тростника,
кукурузы, пшеницы и картофеля. Получен также гибрид двух видов дурмана,
содержащий на 25% больше алкалоида тропана в сравнении с родительскими
растениями.
Меристематическая культура.
Для меристематической культуры используют меристему - образовательную
ткань растений, долго сохраняющую способность к делению и образованию новых
клеток и отличающуюся высокой метаболической активностью. Для
культивирования изолируют конусы нарастания побегов, корней, а также
пазушные почки. Меристематические культуры более известны в садоводстве,
так как они дают возможность получить безвирусные клоны. Из этого можно
сделать вывод, что распределение вирусов в различных частях растения
неравномерное, а меристема их лишена. Из безвирусной меристемы в большом
количестве могут регенерировать генетически идентичные безвирусные
растения. Этот способ используют для выведения сортов картофеля, винограда,
а также декоративных растений и в лесоводстве.
Культура пыльников.
Культура пыльников используется для получения галлоидных растений.
Как правило, растение является диплоидным, т.е. в его клетках содержится
два гомологичных набора хромосом. Только зародышевые клетки являются
гаплоидными. Для получения гаплоидной культуры наиболее удобны незрелые
пыльники, в которых пыльцевые зерна находятся еще в стадии, предшествующей
первому делению микроспор на вегетативное и генеративное зерна. После
переноса стерильных пыльников на питательную среду пыльцевые клетки
начинают делиться. Развивается промежуточный каллюс или сразу образуется
гаплоидный зародыш, который позднее дифференцируется в гаплоидное растение.
Такие гаплоидные растения стерильны, но они могут перейти в диплоиды после
воздействия колхицина или слияния протопластов. Так образуются плодовитые
гомозиготные чистые линии растений, имеющие большое значение для селекции,
поскольку в последующих поколениях всегда встречаются те же заданные
признаки. Благодаря этому методу выведены новые сорта зерновых и табака, а
также получены многочисленные лекарственные растения с улучшенными
свойствами.
Регенерация
Регенерация - явление восстановления целого организма из его части.
При культивировании регенерация может происходить разными путями: прямая
регенерация из культур меристемы, верхушечных побегов, пазушных почек и
узлов, причем дифференциация управляется фитогормонами, и косвенная, с
промежуточной стадией каллюса. В последнем случае возможны также возможны
два пути: при органогенезе определенными концентрациями и соотношениями
фитогормонов вызывают образование придаточных побегов и корней; при
соматическом эмбриогенезе в каллюсе образуются зародыши, из которых
вырастает растение, затем переносимое в грунт.
Список использованной литературы.
1) "Биология" - еженедельное приложение к газете "Первое сентября" (№21
1998)
2) "Биология" - еженедельное приложение к газете "Первое сентября" (№21
1997)
3) "Биология" - еженедельное приложение к газете "Первое сентября" (№7
1998)
4) Медицинская газета №34-35 (29 апреля 1998 г.)
5) Энциклопедия "Биология"
